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新型コロナウイルス(SARS-CoV-2)に対する研究報告 第二報

試験条件

検体の調整

食品添加物殺菌料亜塩素酸水の製剤をポリスチレンチューブを用いて蒸留水で希釈した。ウイルスとの反応もポリスチレンチューブ内で行った。

ウイルス液の調製

VeroE6/TMPRSS2細胞(10-cm ディッシュ)にm.o.i. が約0.01になるようにウイルス液を細胞に接種して、1時間後に接種液を吸引除去してDMEM (5 ml)を入れて培養した。細胞変性効果が細胞全体に広がって細胞がはがれ始めたところで培養上清を回収し、低速遠心と5-µm フィルターで細胞を完全に除いてウイルス液とした。

効果確認試験方法

抗ウイルス試験の方法は以下のように行った。ウイルス液と試薬を(1:9)の比率で混合し、室温で所定の時間反応させたのちに10% FBS含有DMEMで100倍稀釈して反応を止めたのちに、さらに10-8まで10倍段階希釈をおこなった。VeroE6/ TMPRSS2細胞(96ウェルプレート)の4個のウェルに各稀釈のウイルス液を50 µl/wellで接種し、一時間後に吸引除去して100 µl/wellのDMEMに置換して培養した。3日後に各ウェルの感染の有無を判定して、Behrens-Karber法で50%感染希釈を計算し、ウイルス感染価 [50% Tissue culture infectious dose (TCID₅₀)/ml]を求めた。

効果確認試験アウトライン

結果

食品添加物殺菌料亜塩素酸水の製剤1/10希釈液でウイルス感染価は検出限界まで低下していた。なお、この感染価は検出限界であり、ウイルス感染細胞は全く観察されていない。よって、実際の感染価はこれよりも低く、ウイルスは完全に不活化 (≧99.9999%除去) されたと考えられる。次に、食品添加物殺菌料亜塩素酸水の製剤 1/20希釈液では、Cont.区(血清非含有DMEM)に比べると、ウイルス感染価は、2Log~3Logにまで低減(99.4%~99.9%除去)されていた。
また、反応時間1分間と 5分間とでは、ウイルスの不活化(除去)効果に有意差はみられず、1分間処理で、すでに相当な除去効果があることが判った。

※効果の評価は、平成 27 年度 ノロウイルス不活化条件に関する調査報告書(国立医薬品食品衛生研究所)の評価基準に準じている。

以上の結果は、広島大学大学院医系科学研究科ウイルス学研究室 坂口 剛正 教授が実施された試験結果(未公表)に基づき、三慶グループが作成したものである。